和导师一双一的相通每次齐让我突然红温女优明星

导师

小王，你外泌体那篇著述返修意见弄好了吗，实现期间未几了。

其它修改意见齐弄好了，只剩外泌体的电镜不雅察一直作念不好，可能是索要后的外泌体样品中含有卵白质、脂质等杂质，影响了后续不雅察。而况拍出来的外泌体格式也有些怪，可能是离心的要求没摸好。

小王

导师

你不错试试层析法纯化外泌体，不错保证结构好意思满，也省得你整天抢占离心思，师弟师妹们齐懊悔你专横呢

差速离心是现在最常用的外泌体纯化技巧，通过高速离心将外泌体从样本中千里淀并纯化出来。该门径索要纯粹，索要过程中不会引入其它标志物，但操作繁琐，费时冗忙，而况操作过程中的高速离心可能会导致外泌体结构的艰涩。一些生物样本中含有的死细胞开释的囊泡以及血清因素也会让得到的外泌体纯度远远不达标，影响后续的功能征询与断然。

何如快速纯化外泌体又尽可能保握其原有结构？不错推敲 ExoPura® Basic 外泌体纯化柱试剂盒！无需借助离心思，上样后仅需 30 min 即可灵验去除样品中卵白和游离核酸，卵白去除率在 90% 以上，取得高纯度的外泌体馏分。更适用于主意度高的非复杂生物样本（细胞上清、牛奶主意液等）中外泌体囊泡的分离和纯化。好不好用试过才知谈，点击下方图片苦求试用～

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快速外泌体提纯法实验过程（苛刻保藏）

纯化操作视频（点击检察）

可贵实验操作要领

一、 样品准备

1、单次上样体积：0.5 mL ，上样前均衡至室温。

2、浓缩：苛刻使用 Umibio 外泌体索要纯化试剂盒（细胞 上清）【货号 UR52121】、Umibio 外泌体索要试剂盒（乳液）【货号 UR52146】对样品进行 100 倍以上浓缩 ，或聘请超离、切向流、100 kD 超滤等神色，进行 50 倍以上浓缩。

注：严慎使用超离，可能导致卵白聚团影响分袂率。

3、推选 BCA 浓度：含 10% 去外泌体血清的细胞上清粗提 外泌体 BCA 浓度大于 3 μg/μL ，无血清细胞上清粗提外泌体 BCA 浓度大于 1 μg/μL，乳液粗提外泌体 BCA 浓度大于 3 μg/μL。

注：ExoPura® Basic 柱的主要作用为去除卵白和游离核酸等小颗粒物资，纯化过程会对样本进行一定的稀释， 因此应尽量保证样品中有填塞多的囊泡。如需拍摄电镜， 原样颗粒数浓度疏雄壮于 8.0E + 10 particles/mL。

二、 样品预处理

1、使用推选门径浓缩样品。

2、过滤：使用 0.22 μm 滤膜去除粗提外泌体中的大颗粒。 注：使用 Umibio 外泌体索要纯化试剂盒（细胞上清）【货号 UR52121】、Umibio 外泌体索要试剂盒（乳液）【货号 UR52146】索要，经 EPF 柱纯化后的样品无需再使用 0.22 μm 滤膜过滤。

3、准备 PBS：使用新过滤的 PBS（0.22 μm）以幸免沾污和引入大颗粒，确保 PBS 的温度与柱子一样（18～25˚C）。

注：尽量使用本日新配的经过 0.22 μm 滤膜过滤的 PBS，或采购已过膜的 PBS，幸免引入微生物及颗粒物沾污。淌若使用 4°C 雪柜保存的 PBS 溶液，必须均衡到室温后再用，不然有可能在柱子中引入大齐气泡，影响分离后果。

三、 柱均衡与柱清洗

1、实验前确保 ExoPura® Basic 柱处于 18～25˚C 的操作温度限制内，在达到操作温度限制之前，请勿取下柱盖。

2、先取下顶盖上玄色橡胶帽，均衡气压后，再取下顶盖。

3、将 ExoPura® Basic 柱垂直装配到铁架台上，将废液汇聚管（离心管概况烧杯均可）扬弃于柱下方，以备使用。

4、弃去筛板上方的填料保存液（取下底盖，待填料保存液当然流尽或用移液器吸去）。

5、填料保存液流尽后，使用 PBS 对 ExoPura® Basic 柱的 上室进行 2～3 次洗涤，随后加入 20 mL PBS 清洗柱内填料（可分次加，也可衔接适配器，每毫升 PBS 流穿期间约 1.5～2.5 min）。当通盘 PBS 齐插足柱内，液体将罢手流出。

注：适配器的使用神色：绿色适配器上方衔接 20 mL 规格打针器针筒。

6、PBS 流尽后径直上样，或加入 2 mL PBS 盖上底盖备用。

注：若使用适配器，待针筒中 PBS 流尽，柱内剩余约 2～3 mL 缓冲液，可取下适配器，恭候剩余 PBS 流尽，就地进行上样或加入 2 mL PBS 盖上底盖备用。

四、 外泌体汇聚

1、上样前准备：使用推选门径浓缩并过滤样本 ，准备多少标注好的 1.5 mL EP 理财用。

2、加入 0.5 mL 样品：一朝 PBS 不再流出，立行将室温均衡好的 0.5 mL 样品加至 ExoPura® Basic 柱筛板上（若样品不及 0.5 mL，用 PBS 补足）。

注：幸免在过程中长久间罢手柱流，确保囊泡分离后果。

3、流穿 2.87 mL 缓冲液*（空闲体积）：当通盘样品齐插足筛板，底部出口无液体流出后，加入 2.37 mL PBS ，恭候 PBS 流过直至无液体流出。此过程中，共流出缓冲液体积 2.87 mL（0.5 mL 样品体积 + 2.37 mL 缓冲液）

*该体积缓冲液是可丢弃的洗脱液，在含有高比例纯化外泌体溶液流出之前。

注：为准确细目流穿体积，仅加入固定体积溶液，恭候其流过直至流动罢手。

4、汇聚外泌体馏分：立即用新的 EP 管准备汇聚纯化体积， 分次在筛板上方加入 0.5 mL PBS，按 0.5 mL/馏分汇聚 2～3 个馏分（纯度最好为前 2 个馏分即 1 mL 体积，推选归并前 3 个馏分即 1.5 mL 体积），每次恭候体积流过直至流动罢手。

5、过滤外泌体 ：将汇聚的外泌体馏分转入 Exosome Purification Filter（ EPF 柱）上室中，于 4℃ 以 3，000 ×g（～6，200 rpm*）离心 10 min，离心后汇聚 EPF 柱管底的液体，此液体即为过滤的外泌体（注：EPF 柱不成重叠使用）。

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*为约 7 cm 灵验离心半径的小离心思换算（≤ 2 mL 离心管）。

6、测定汇聚产物的颗粒浓度和卵白浓度。如需要，可使用 100 kD 超滤管对汇聚产物进行进一步浓缩富集（选作念）。

五、 柱再生和储存

1、柱再生：汇聚到所需体积后，用 10 mL 再生液进行清洗，再用 20 mL PBS 清洗，随后可进行第二次上样。

2、柱储存：淌若要储存以备翌日使用，先用 10 mL 再生液进行清洗，再按次用 20 mL PBS、20 mL 去离子水 和 20 mL 的 20% 酒精清洗，清洗实现后盖上底盖，倒入保存液（ 20% 酒精），盖上顶盖密封储存。

注：再生液为碱性，幸免再生液清洗后径直添加去离子水或 20% 酒精来均衡纯化柱，驻守树脂床内的盐千里淀并损坏柱。

去离子水清洗可进一步洗去均衡过程中产生的盐，驻守盐与 20% 酒精径直战役产生结晶。

可按每毫升液体流穿需 1.5～2.5 min 估算各要领清洗期间，幸免柱内液体流尽后，填料干放期间过长。

留意事项：

1、 当外泌体馏分用于后续高通量测序概况其他组学分析时，为幸免交叉沾污，苛刻使用新柱。

2、 再生过程中不成幸免会产生盐，盐千里淀影响填料性能，每根柱子重叠使用次数苛刻不逾越 5 次。

3、 请留意使用过程中勿将柱子从高处摔落或摔打，以免导致柱床闹翻。

4、 再生液为碱性，有一定腐蚀性，请务必小心使用！

按照以上要领，通过聘请尺寸排阻时代，字据颗粒的大小，在颗粒通过装有多孔多糖树脂的柱子时对其进行分离，快速、高效取得高纯度的外泌体，适用于从主意度高的非复杂生物样本（如细胞上清、牛奶主意液等）平分离纯化外泌体囊泡。宇玫博外泌体索要纯化试剂盒-柱纯化，助你科罚每一次外泌体提纯。

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居品上风

1）低剪切力无损分离：通过重力施加最小的机械应力，保留外泌体好意思满结构；

2）纯粹快捷：无需大型诞生（超速离心思）上样到取得外泌体仅需 30 min；

3）可重叠使用：每支纯化柱重叠使用次数可达 5 次；

4）馏分纯度高：灵验去除样品中卵白和游离核酸，卵白去除率在 90% 以上。

案例展示

ExoPura® Basic 纯化 293T 细胞上清（含 10% 去外泌体血清）

*样品预处理：50 mL 上清经 Umibio 外泌体索要纯化试剂盒（细胞上清）浓缩至 0.5 mL，过 EPF 柱

ExoPura® Basic 纯化牛奶上清

*样品预处理：50 mL 上清经 Umibio 外泌体索要纯化试剂盒（细胞上清）浓缩至 0.5 mL，过 EPF 柱

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试验操办：王丹琦

试验审核：吴军

题图开首：图虫创意女优明星